R&D

Tinkamos mitybos algoritmo sukūrimas, atsižvelgiant į su alkiu susijusio FTO (rs9939609) ir (rs8050136) genotipą


 Lietuvos sveikatos mokslų universiteto Kardiologijos instituto Molekulinės kardiologijos laboratorija

 Lietuvos sveikatos mokslų universiteto Medicinos akademijos Kardiologijos klinika

 VŠĮ „Pramogų ruletė“


Dr. Vacis Tatarūnas

Dr. Diana Žaliaduonytė-Pekšienė

Justina Atkočaitytė

Renata Valevičienė


   Projekto uždaviniai

1. Dalyvauti tyrime kviečiami sveiki savanoriai, kuriems ištiriamas FTO (rs9939609) ir (rs8050136) genotipas tikro laiko PGR metodu

2. Registruojami įtrauktųjų į tyrimą mitybos įpročiai, kūno svoris bei liemens apimtis mėnesio eigoje

3. Sudaromas maitinimosi planas, atsižvelgiant į kiekvieno asmens genetinius ypatumus

4. Tiriamieji pakartotinai stebimi 1 mėnesį

5. Sudaromas mitybos pagal genotipą algoritmas

 

Sprendžiami neapibrėžtumai

Projektu siekiama pagrįsti maitinimosi ypatumus atsižvelgiant į genotipą. Sukurtas algoritmas galės būti taikomas plačiuose visuomenės sluoksniuose maitinimosi algoritmui sudaryti kiekvienam asmeniui individualiai.  

 

Darbo rezultatas

Ištirti 40 tiriamųjų;

parengtas tyrimo metodo aprašas;

parengtas mitybos, energetine prasme, algoritmas, pagal genotipą.



Ataskaitos dėstomoji dalis


Tyrimo metodai

 

Tyrimui atlikti buvo išduotas Kauno regioninio biomedicininių tyrimų etikos komiteto leidimas Nr BE-2-25. Tyrimas buvo atliekamas Lietuvos sveikatos mokslų universiteto (LSMU) Kardiologijos klinikoje ir atestuotoje LSMU Kardiologijos instituto Molekulinės kardiologijos laboratorijoje. Tyrime dalyvauti pakviesti sveiki savanoriai, nesergantys jokiomis ligomis. Tyrime dalyvauti sutiko (n=40) tiriamųjų.

Visi tiriamieji pokalbio su gydytoju kardiologu metu buvo supažindinti su tyrimo eiga. Sutikę dalyvauti ligoniai pasirašė Kauno regioninio biomedicininių tyrimų etikos komiteto patvirtintas sutikimo formas.

 

Tyrime sutikę dalyvauti ligoniai turėjo:

 

Pokalbio-apžiūros metu pateikti teisingus duomenis apie save, leisti išmatuoti šiuos kūno parametrus:

1. Ūgį (cm)

2. Svorį (kg)

3. Liemens apimtį (cm)

4. Sistolinį kraujospūdį dešinėje rankoje

5. Diastolinį kraujospūdį dešinėje rankoje

6. Sistolinį kraujospūdį kairėje rankoje

7. Diastolinį kraujospūdį kairėje rankoje

8. Širdies susitraukimų dažnį

 

Atsakyti į šiuos klausimus:

1. Nutukimas vaikystėje

2. Vartojami vaistai

3. Rūkymas


KITI TIRIAMOJO SUSIRGIMAI

1. Arterinė hipertenzija

2. Cukrinis diabetas

3. Lėtinė obstrukcinė plaučių liga

4. Skydliaukės patologija

5. Skrandžio opaligė

6. Kraujavimas

7. Dislipidemija


MITYBA (ką tiriamasis valgo)

1. Mėsa

2. Daržovės

3. Vaisiai

4. Sultys

5. Arbata

6. Maisto papildai

7. Riešutai

8. Česnakas

9.Jonažolė

10. Medetka

11. Čiobrelis

12. Šalavijas

13. Imbieras

14. Burokėliai

15. Citrusiniai vaisiai

16. Kivi

17. Alavijas

18. Cinamonas

19. Gluosnis

20. Pelkinė vingiorykštė

21. Gyslotis

22. Ginkmedis

23. Spanguolė

24. Putinas

25. Šeivamedis

26. Ženšenis

27. Ramunėlė


DARBO POBŪDIS

1. daugiausia sėdimas

2. sėdimas ir/ar stovimas

3. Judamas

4. Sunkus fizinis


SPORTAS

1. Kasdien

2. 2-3 kartus per sav.

3. Kartą per sav.

4. Negaliu mankštintis

5. Nesimankštinu


ALKOHOLIO VARTOJIMAS

1. Kasdien

2. Kiek kartų per sav.

3. Kartą per sav.

4. Kelis kartus per mėn,

5. Gėriau anksčiau, dabar - ne

6. Niekada negeriu

7. Alkoholiniai VNT. Per dieną


ŠEIMOS ANAMNEŽĖ

1. Miokardo infarktas

2. Galvos smegenų insultas

3. Staigi mirtis

4. Tėvų nutukimas KMI>30

5. Tėvų nutukimas KMI>35

 

Duoti kraujo DNR ištyrimui.

Tam buvo imami 2 mėgintuvėliai su antikoaguliantu K2EDTA po 3 ml kraujo. Kraują ištyrimui ėmė patyrusi LSMU Kardiologijos instituto laborantė, turinti leidimą imti kraują tyrimams.

 

Mėnesį laiko registruoti savo mitybos įpročius, atvykti į LSMU Kardiologijos kliniką išsimatuoti kūno svorį ir liemens apimtį praėjus 1 mėnesiui  nuo pirmo tyrimo. Pokalbio su gydytoju metu tiriamiesiems buvo rekomenduojama keisti/nekeisti mitybos ypatumus ir stebėti dar 1 mėnesį. Iš gautų duomenų buvo sudaromas algoritmas mitybos korekcijai atsižvelgiant į genotipą ir kitus duomenis.

 

Laboratorinis kraujo mėginių ištyrimas

 

DNR išskyrimas iš kraujo druskiniu metodu, DNR kokybės patikrinimas spektrofotometriniu metodu (Nanodrop 2000) ir DNR genotipavimas buvo atliekamas atestuotoje LSMU Kardiologijos instituto Molekulinės kardiologijos laboratorijoje.

 

Sekoskaita ir genotipo tyrimas tikro laiko PGR metodu

 

Fat mass and obesity-associated protein (FTO) (rs9939609) ir (rs8050136) genotipo standartų identifikavimas sekoskaitos metodu

Sekoskaita atlikta Lietuvos sveikatos mokslų universiteto Kardiologijos instituto Molekulinės kardiologijos laboratorijoje naudojant 8 kapiliarų ABI 3500 Genetic Analyzer sekvenatorių (ABI, JAV). Sekoskaitai atlikti naudoti 3500 serijai skirti reagentai ir priemonės. Sekoskaitos būdu buvo identifikuojami 3 skirtingą genotipą turintys tiriamieji, kurių DNR naudota tikro laiko PGR reakcijų atlikimo patikrinimui.

Pradmenų kūrimas

Sekos pradmenų kūrimui buvo paimtos iš JAV Nacionalinio biotechnologinės informacijos centro (National Center for Biotechnology Information, JAV) http://www.ncbi.nlm.nih.gov/. Pradmenys reikiamam geno fragmentui pagausinti, buvo kuriami atsižvelgiant į pradmenų kūrimo taisykles.

Sekoskaitos reakcijų paruošimas ir sekoskaita:

  1. DNR pagausinamas įprastinio PGR metodu. Dedami sekai specifiniai pradmenys
  2. Reakcijos mišinys valomas silikagelio kolonėlėmis, skirtomis pašalinti reakcijos liekanas. Gel-elektroforezės metodu frakcionuojamas PGR produktas ir vertinama jo kokybė.
  3. Ruošiamas reakcijos mišinys su BigDye (LifeTechnologies, JAV) terminatoriumi, kuris į seką įterpia dideoksinukleotidus
  4. Reakcijos mišinys valomas specialiomis kolonėlėmis, skirtomis pašalinti reakcijos komponentų liekanas
  5. Reakcijos mišinys dedamas į specialiai tam skirtas reakcijos plokšteles ir nuskaitomos fragmentų sekos. Vertinamas ir interpretuojamas rezultatas.

Fat mass and obesity-associated protein (FTO) (rs9939609) ir (rs8050136) genotipavimas tikro laiko PGR metodu 

Tyrimas atliktas Lietuvos sveikatos mokslų universiteto Kardiologijos instituto Molekulinės kardiologijos laboratorijoje naudojant tikro laiko PGR termociklerį ABI 7900HT Fast Real-Time PCR (ABI, JAV) bei komercinius Taqman molekulinius žymenis (LifeTechnologies, JAV), skirtus fat mass and obesity-associated protein (FTO) (rs9939609) ir (rs8050136) polimofizmui tirti.

Tikro laiko polimerazės grandininė reakcija atlikta standartinėmis gamintojo rekomenduojamomis sąlygomis (laikantis temperatūros režimo bei sudėtinių reakcijos komponentų koncentracijų, pagal gamintojo pateiktą protokolą). Naudotas universalus Taqman 2x (LifeTechnologies, JAV arba Thermo Fisher Scientific, Lietuva) mišinys. Tirtosios DNR buvo imama 10ng, kaip ir rekomenduojama gamintojo.

Kiekvieną kartą atliekant reakcijas, siekiant išvengti klaidų, buvo dedami sekoskaitos būdu nustatytų genotipų standartai.

Standartinės reakcijos sąlygos genotipavimo reakcijai paruošti :

  1. TAQMAN žymenų - 1,25µl (20x) (Applied Biosystems, Jungtinė Karalystė)
  2. Taqman 2x universalaus reakcijos mišinio – 12,5µl (Applied Biosystems, Jungtinė Karalystė arba Thermo Fisher Scientific, Lietuva)
  3. PGR grynumo vandens - 10,25µl (Fermentas, Lietuva)
  4. 1 µl ligonio genominės DNR (10 ng/tyrimui).


Statistinė analizė

Tyrimo rezultatai pateikti kaip vidurkis±standartinis nuokrypis (SN). Tiriamųjų asmenų genotipų dažnis pateiktas procentais.


Rezultatai

 

Tiriamųjų apibūdinimas pagal klinikinius parametrus ir genotipą pirmo tyrimo metu

 

Tiriamųjų apibūdinimas, atsižvelgiant į anamnezę

 

Imtyje buvo 25 proc. rūkančiųjų (1 lentelė). Atitinkamai, 12,5 proc. ir 10 proc. tiriamųjų turėjo skydliaukės ligų ir opaligę. Sėdimą ar stovimą darbą dirbo didžiausia dalis – 75 proc. tiriamųjų. Tik 22,5 proc. dirbo judamą darbą, tačiau bent kartą per savaitę sportu užsiiminėjo 55 proc. tirtųjų.

Šeimos anamnezėje atitinkamai 32,5 proc. ir 30 proc. giminaičių sirgo galvos smegenų išemija ar miokardo infarktu.

 

Tiriamųjų apibūdinimas atsižvelgiant į mitybos įpročius

 

Kasdien daržoves valgė visi tiriamieji (2 lentelė). Vaisius ir mėsos produktus – daugiau nei 90 proc. Arbatą ir burokėlius daugiau kaip 2/3 tiriamujų. Alkoholio negeriančių buvo 1/5 visų tiriamųjų. Nė vienas tiriamasis nevartojo alkoholio kasdien.

 

Tiriamųjų apibūdinimas atsižvelgiant į genotipą

 

Tiriamųjų imtyje dažniausiai nustatytas heterozigotinis FTO geno variantas (TA/AC) – 50 proc. Rečiau – FTO (TT/CC) – 32,5 proc. (3 lentelė).

Tiriamieji, turintys TA/AC buvo vyresni (38,9±4,8 metai), aukštesni (174,4±6,7 cm), svėrė daugiau (79,0±15,0), turėjo didesnį arterinį kraujospūdį (3 lentelė), nei kitokį genotipą turintys tiriamieji. FTO TA/AC heterozigotai turėjo mažesnę liemens apimtį (ir mažiau pilvo riebalų) – (88,8±11,9 cm), nei FTO AA/AA (90,6±10,2 cm) genotipą turintys tiriamieji, nors turėjo tokį patį KMI kaip ir FTO AA/AA. Heterozigotams nustatytas mažiausias širdies susitraukimų dažnis (3 lentelė).


SN - standartinis nuokrypis; KMI – kūno masės indeksas; ŠSD – širdies susitraukimų dažnis


2. Tiriamųjų apibūdinimas pagal klinikinius parametrus ir genotipą antro tyrimo metu. Maitinimosi algoritmas

 

Standartinė, subalansuota mityba, energetiniu požiūriu gaunama iš įvairių maisto grupių:

 

Baltymai

Riebalai

Angliavandeniai


ŽMOGAUS PAROS ENERGIJOS VIENETO (Eparos) APSKAIČIAVIMAS

Suaugusiųjų žmonių paros energijos vienetą turi sudaryti: kalorijų kiekis, kurį turi gauti žmogus su maistu, kuris priklauso nuo fizinio aktyvumo ir energijos apykaitos (Eapykaita).
 Tikslus paros energijos vienetas (Eparos) apskaičiuojamas energijos apykaitą (Eapykaita) padauginus iš fizinio aktyvumo koeficiento (Kaktyvumo):

 

Eparos = Eapykaita × Kaktyvumo

 

Eapykaitos apskaičiuojama pagal lygtį:

 

Moterims: Eapykaitos = 655 + (9,6 x W) + (1,8 x H) – (4,7 x A)


Vyrams: Eapykaitos = 65,4 + (13,7 x W) + (5,0 x H) – (6,8 x A)



W – kūno masė, kg H – ūgis, cm A – amžius, metais

Fizinio aktyvumo koeficientas (Kaktyvumo) priklauso nuo atliekamo fizinio darbo sunkumo.

FTO geno variantas (AA/AA) - koeficientas priklauso nuo genotipo ir neįtakoja nutukimo.

FTO geno variantas (TA/AC) - koeficientas priklauso nuo genotipo ir įtakoja nutukimą tiesiogiai (x1)

FTO geno variantas (TT/CC) - koeficientas priklauso nuo genotipo ir įtakoja nutukimą tiesiogiai (x2)

 

Fizinio aktyvumo grupė. Atliekamas fizinis darbas

Aktyvumo koeficientas (K)

Labai lengvas ir lengvas darbas   1,5

Vidutinio sunkumo darbas   1,7

Sunkus darbas   2,0

Labai sunkus darbas (vyrams)  2,0 >
(vidutiniškai 2,2)

 

Pasaulio sveikatos organizacija rekomenduoja, kad suaugusiųjų energija, gaunama iš riebalų, mažiausiai turi sudaryti 15 proc. paros maistinio davinio energinės vertės. Reprodukcinio amžiaus moterų energija, gaunama iš riebalų, turėtų sudaryti mažiausiai 20 proc. paros maistinio davinio energinės vertės. Riebalų suvartojimo maksimumas gali būti iki 30 proc. eikvojamos energijos. Sunkiai fiziškai dirbantiems asmenims darbo dienomis leidžiama suvartoti 35 proc.

Suaugusiems žmonėms rekomenduojama baltymų suvartojimo norma yra 0,75 g vienam kilogramui kūno masės per parą, nepriklausomai nuo amžiaus. Pasaulio sveikatos organizacija rekomenduoja, kad

 

Baltymai turėtų sudaryti 10-15 proc.,

Angliavandeniai 55-62 proc.,

Riebalai – 28-32 proc. paros maisto davinio energinės vertės.

 

RGB spalvų paletė

Maistinė sudėtis. Procentinė išraiška

R Riebalai 28

G Baltymai 12

B Angliavandeniai 60


Vaizdavimas

 

Nagrinėjamas pvz. Suaugusi moteris, 70 kg, dirbanti sėdimą ar tiesiog mažai fiziškai aktyvų darbą, turėtų suvartoti iki 2000 kilokalorijų (kcal.) per dieną. Kraujo FTO geno variantas (AA/AA) - koeficientas priklauso nuo genotipo ir neįtakoja nutukimo.

 

Paros norma apskaičiuojama sekančiu būdu

 

MAX.

Riebalai = R x 2000 kcal (28%) = 560

Baltymai = G x 2000 kcal (12%) = 240

Angliavandeniai = B x 2000 kcal (60%) = 1200

 

Riebalai = R x 9   (tiksliai skaičiuoti)

Baltymai = G x 4

Angliavandeniai = B x 4

 

Spalvos RGB apskaičiavimo metodika

 

R (RED) (Riebalai) = 255 - Riebalai (gr.) x 9 (energ. vnt. kcal) x R%

G (GREEN) (Baltymai) = 255 - Baltymai (gr.) x 4 (energ. vnt. kcal) x B%

B (BLUE) (Angliavandeniai) = 255 - Angliavandeniai (gr.) x 4 (energ. vnt. kcal) x A%

 

Moteris vartoja

Ingridientai

 

Ingridientai

Antis, ne laukinė 1000 g.

Pipirai, juodieji, malti 1 g.

Obuolių sultys 322 g.

Lauro lapas 0 g.

Česnakas 12 g.

Druska 4 g.

Sezamo sėklos 2 g.

Bulvės, išvirti 852 g.


Iš viso: 2193 g. (porcijos svoris: 548 g.)


Vienoje porcijoje: 1816 kcal

1-maisto

Pav. 1816 kcal


2-maisto

Pav. 1816 kcal ir QR nuoroda

 

 

 


© Maistas Spalvomis 2016